Пцр Диагностика Саркоптоза
У нас не самые низкие цены
у нас высокое качество
Метод ПЦР основан на принципе естественной репликации ДНК.Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР-диагностика) позволяет выявить возбудителя непосредственно в гене, который содержится в исследуемых материалах. ПЦР-диагностика позволяет быстро и наиболее точно выявить наличие возбудителя. Поскольку методика основана на исследовании дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), то применительно к нему можно встретить и другое название: методика ДНК-диагностики.
Метод ПЦР, иначе называемый ДНК-диагностика, позволяет выявлять единичные клетки возбудителей многих инфекционных заболеваний. При этом анализ ДНК можно проводить на любом материале. ПЦР диагностика имеет огромное значение для обследования человеческого организма.
Суть метода заключается в том, что молекулы ДНК считывается информация о развитии клетки ее последующих поколений. Для выявления возбудителя достаточно всего лишь нескольких молекул. ДНК-диагностику применяют при исследовании материала, взятого из уретры, а также и цервикального канала, и влагалища, и осадка мочи и прямой кишки. Механизм получения материала в ПЦР-диагностике отлажен до автоматизма, а благодаря своей высокой чувствительности и точности, методика может использоваться для большого числа пациентов.
Методом ПЦР-диагностики можно легко обнаружить такие заболевания как: урогенитальный хламидиоз, урогенитальный микоплазмоз, уреаплазмоз, гонорея, трихомониаз, гарднереллез и многие другие вирусные, бактериальные и грибковые инфекции. Бывают случаи, когда нужно выявить, насколько эффективно проводимое лечение, до какой степени заболевание излечено – в этом случае метод ДНК-диагностики просто незаменим. Особенно это важно при исследовании скрытых инфекций и инфекций, передаваемых половым путем.
Методика широко применяется в клинической лабораторной диагностике, где ПЦР-диагностика имеет поистине огромное значение при проведении всех видов обследований, а также неоценима его роль и в практическом здравоохранении.
Однако, следует отметить, что метод ПЦР-диагностики дополняет спектр традиционных методов исследования. Наиболее рационально и эффективно применение ПЦР для обнаружения трудно выявляемых микроорганизмов, организмов, способных длительно существовать в организме человека, и атипичных форм бактерий.
Метод ПЦР основан на принципе естественной репликации ДНК.Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР-диагностика) позволяет выявить возбудителя непосредственно в гене, который содержится в исследуемых материалах. ПЦР-диагностика позволяет быстро и наиболее точно выявить наличие возбудителя. Поскольку методика основана на исследовании дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), то применительно к нему можно встретить и другое название: методика ДНК-диагностики.
ПЦР-диагностика
ПЦР-диагностика на сегодняшний день является одним из самых современных, точных и быстрых методов исследования для выявления многих заболеваний в микробиологии. Данный вид диагностики выявляет наличие инфекционных возбудителей в случаях, когда уже другие методы (микроскопические, иммунологические, бактериологические) это сделать не в силах.
Высокая точность этого метода достигается с помощью значительной специфичности ПЦР-диагностики, потому как в изучаемом материале выявляется уникальный фрагмент ДНК или РНК, который свойственен лишь для этого возбудителя, и открыто сообщает о его присутствии в организме человека.
Как проводится ПЦР-диагностика в Республиканском Центре Репродукции Человека и Планирования Семьи
В Республиканском Центре Репродукции Человека и Планирования Семьи проводится диагностика с помощью полимеразно цепной реакции.
ПЦР-диагностика включает в себя три основных процедуры: процесса подготовки изучаемой пробы материала, сводящаяся к выделению ДНК или РНК, непосредственно самой полимеразной цепной реакции и завершающей детекции продукта ПЦР.
При этом процессе чужеродный генетический материал неоднократно копируется в пробирке с помощью ДНК-полимеразы, после чего многомиллионное число копий характерных фрагментов ДНК визуально регистрируются.
Это разрешает при ПЦР-диагностике раскрывать даже единичные клетки вирусов или бактерий. Или же в тех сложных случаях, когда нужно обличить возбудителей паразитирующих внутри клетки или же с высокой антигенной изменчивостью – такие возбудителей крайне сложно обнаружить другими методами.
Скорость процедуры исследования устанавливается тем, что чтобы найти его не нужно долго выделять и выращивать возбудителя. Весь процесс автоматизирован и стандартизирован, даже до сбора пробы для выделения нуклеиновой кислоты из вируса или бактерии, что в то же время уменьшает вероятность ошибок, которые связанны с тестированием проб и ручной подготовкой. Результат исследования можно получить в течение нескольких часов, в случае положительного результата ПЦР-диагностики чаще всего выражающегося по четырехбальной шкале от 1 до 4 плюсов.
ПЦР-диагностика хороша и тем, что разрешает обнаружить чужеродное ДНК в разнообразных биологических тканях – моче, мокроте, слизи, крови, соскобе эпителиальных клеток. Будут выявлены все возбудители, присутствовавших в изучаемом материале ДНК. Большую популярность ПЦР-диагностика завоевала в обнаружении инфекций, передаваемых половым путем, особенно хронических или скрытых — хламидиоза, гонореи, уреаплазмоза, микоплазменной инфекции, гарднереллеза. Возбудителей этих заболеваний тяжелее всего выявить классическим способом выращивания клеток в условиях лаборатории, кроме того антитела в серологических реакциях возможно будут плохо определяться.
Также при помощи ПЦР-диагностики можно исследовать вирусы – к примеру, вирус папилломы человека (ВПЧ), для этого берут соскоб папилломатозных элементов, а для исследования вирусных гепатитов с помощью ПЦР-диагностики производят забор крови из вены. Помимо этого не стоит забывать о ПЦР-диагностике вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), особенно при врожденной ВИЧ-инфекции.
ПЦР-диагностика на сегодняшний день является одним из самых современных, точных и быстрых методов исследования для выявления многих заболеваний в микробиологии. Данный вид диагностики выявляет наличие инфекционных возбудителей в случаях, когда уже другие методы (микроскопические, иммунологические, бактериологические) это сделать не в силах.
Специалисты компании «Литех» совместно с учебно-методическим центром НИИ физико-химической медицины МЗ РФ проводят курсы по повышению квалификации специалистов в соответствии с лицензией Минобразования России No 1382 от 09 июня 2020 г.
Подготовка работников клинической лабораторной службы ведется по следующим программам:
Генодиагностика в современной медицине:
- Методы ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний человека
- Выявление полиморфизмов в геноме человека методом ПЦР
Основные вопросы учебной программы:
- Амплификационные технологии. Метод полимеразной цепной реакции
- Способы подготовки клинических проб для выявления нуклеиновых кислот
- Интерпретация результатов лабораторных исследований при диагностике инфекций, передающихся половым путем, вирусных гепатитов, легочного и внелегочного туберкулеза и др.
- Принципы организации ПЦР-лаборатории. Нормативно-методические документы Минздрава России
- Биочипы. Принципы работы, перспективы использования
- Методы анализа точечных мутаций
Циклы обучения проводятся ежемесячно. Начало цикла — последняя неделя каждого месяца. Продолжительность курса — 8 рабочих дней.
Стоимость обучения одного специалиста – 9 000 рублей.
По окончании обучения выдается документ Государственного образца — Удостоверение о краткосрочных курсах повышения квалификации.
Циклы обучения проводятся ежемесячно. Начало цикла — последняя неделя каждого месяца. Продолжительность курса — 8 рабочих дней.
ПЦР диагностика инфекций – расшифровка
ПЦР в гинекологии (метод полимеразной цепной реакции) является методом идентификации возбудителей различных инфекционных заболеваний, который основывается на определении их генетического материала, забранного у пациента. При проведении данного исследования взятый материал помещают в специальный, так называемый, реактор. В качестве исследуемого образца могут выступать: выделения, кровь, слизь. К взятому образцу добавляют специальные ферментативные элементы. С их помощью осуществляется синтез копии ДНК возбудителя. Данная реакция имеет цепной характер. За это метод и получил свое название.
Диагностика инфекции при помощи ПЦР, является сложным процессом, расшифровкой результатов которого занимаются специалисты. Данный метод помогает выявить многие скрытые инфекции, которые входят в ПЦР:
- папилломавирусные;
- урогенитальные (хламидиоз, трихомониаз, уреаплазмоз).
ПЦР является основным методом, позволяющим диагностировать ВИЧ-инфекцию.
После проведения диагностики инфекций методом ПЦР результаты исследования подвергаются расшифровке. При этом используется 2 формулировки: «отрицательный результат» и «положительный результат».
При положительном результате врачи с уверенностью могут сказать, что в организме обследуемого человека присутствует тот или иной возбудитель. Отрицательный результат же указывает на полное отсутствие в организме человека инфекции.
Данный метод диагностики имеет много преимуществ, основными из которых являются:
- Прямая диагностика наличия в организме обследуемого возбудителя. Иные способы диагностики способны выявить содержание в организме лишь белков-маркеров. ПЦР же непосредственно указывает на наличие в организме обследуемого конкретного возбудителя.
- Высокая степень специфичности. Осуществляется это благодаря тому, что в исследуемом врачами образце материала выделяют участок цепи ДНК возбудителя, по которому его идентифицируют.
- Высокая чувствительность метода. Метод ПЦР дает возможность выявить и единичные клетки вирусов. Данное свойство является неоценимым, так как многие возбудители по своей природе условно-патогенны и опасны для здоровья человека лишь в больших количествах. Благодаря ПЦР инфекцию можно установить, не дожидаясь того момента, пока возбудитель размножится.
- Возможность одновременно диагностировать нескольких возбудителей, взяв при этом только одну пробу материала.
Диагностика инфекции при помощи ПЦР, является сложным процессом, расшифровкой результатов которого занимаются специалисты. Данный метод помогает выявить многие скрытые инфекции, которые входят в ПЦР:
ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ САРКОПТОЗА СВИНЕЙ
УДК 619:616. 995.132:636.4 ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ САРКОПТОЗА СВИНЕЙ Фаррахов А.И. аспирант; Латыпов Д.Г. д.в.н., доцент Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана тел.: (843) 238-25-69 Ключевые слова: саркоптоз, диагностика, лабораторные методы. Key words: sarcoptosis, diagnostics, laboratory methods. В практических условиях диагноз на саркоптоз свиней ставят на основании эпизоотологических данных и клинических признаков. Окончательный диагноз на саркоптоз устанавливают на основании лабораторного исследования соскобов кожи. Для обнаружения в коже чесоточных клещей, их яйца, личинок и нимф предложен ряд методов лабораторных исследований (различные варианты компрессорного метода, методы Добычина, Приселковой, Шика и др.). Однако в доступной литературе мы не нашли, какой из этих методов является наиболее эффективным (1,2). Исходя из вышеизложенного, перед нами была поставлена задача изучить эффективность различных лабораторных методов для диагностики саркоптоза свиней. Материал и методы. Для проведения лабораторных исследований от 10 больных тотальной формой саркоптозом поросят 3-4 месяцев брали по 9 образцов соскобов (на каждый вариант исследования по одному соскобу) с различных участков кожи (ушная раковина, области шеи, спины, паха) по краям очага поражения. Для этого брюшистым скальпелем делали глубокие соскобы до появления следов крови (сукровицы). Места взятия соскобов обрабатывали молочной кислотой, т.к. она не обладает раздражающим действием, а бактерицидные ее свойства препятствуют развитию пиогенных осложнений. Для этого использовали следующие методы диагностики чесоточных клещей: 1. Метод компрессорного исследования (вариант 1). В этом варианте соскоб кожи помещали на предметное стекло, добавляли несколько капель 10%-ного раствора едкого калия и накрывали вторым предметным стеклом, слегка надавливали и через 10 минут рассматривали под малым увеличением микроскопа. 2. Метод компрессорного исследования (вариант 2). При проведении этого исследования соскоб кожи помещали на предметное стекло, добавляли несколько капель керосина и накрывали вторым предметным стеклом, слегка надавливали и спустя 10 минут 304
микроскопировали. 3. Метод компрессорного исследования (вариант 3). В этом варианте соскоб кожи помещали на предметное стекло, добавляли несколько капель глицерина и накрывали вторым предметным стеклом, слегка надавливали и через 10 минут микроскопировали. 4. Метод компрессорного исследования (вариант 4). Соскоб кожи помещали на предметное стекло, добавляли несколько капель подсолнечного масла и закрывали вторым предметным стеклом, слегка надавливали и спустя 10 минут микроскопировали. 5. Метод компрессорного исследования в нашей модификации (вариант 5): соскоб кожи помещали на предметное стекло, добавляли несколько капель молочной кислоты и закрывали вторым предметным стеклом, слегка надавливали и через 10 минут микроскопировали. 6. Метод Приселковой. Соскоб кожи помещали в бактериологическую чашку, закрывали крышкой и ставили ее вверх дном на банку с подогретой до 50 водой. Через 30 минут чашку с банки снимали и переворачивали дном вниз. При просмотре крышки под микроскопом обнаруживали живых клещей. 7. Метод Шика. В центрифужную пробирку помещали соскоб кожи, добавляли 10-12 мл 10%-ного едкого калия, подогревали и помешивали в течение 10 минут. После центрифугирования в течение 3-5 минут жидкость из пробирки сливали, а осадок микроскопировали для выявления мертвых клещей. 8. Метод Добычина. Соскоб кожи помещали в пробирку, добавляли 1 мл 10%-ного едкого калия, нагревали на пламени спиртовки в течение 1-2 минут и оставляли пробирку на 5 минут в покое для лучшей мацерации корок и чешуек. Затем пробирку наполняли доверху 60%-ным раствором гипосульфата натрия. Спустя 5 минут при помощи металлической петли брали верхнюю пленку жидкости, помещали ее на предметное стекло и исследовали под малым увеличением микроскопа. 9. Модифицированный способ. В центрифужную пробирку помещали соскоб кожи и добавляли 1 мл молочной кислоты, нагревали на пламени спиртовки в течение 1-2 минут и оставляли пробирку на 5 минут в покое для лучшего размягчения корок и чешуек. Затем пробирку наполняли насыщенным раствором цинка хлорида (на 1 л воды 2 кг ZnCl2; p 1,82) и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 2-х минут. После прикасанием металлической петли снимали верхнюю пленку жидкости, помещали ее на предметное стекло и исследовали под малым увеличением. Результаты исследований. Эффективность различных лабораторных методов диагностики саркоптоза свиней показана в таблице. Из таблицы видно, что при применении первого варианта компрессионного исследования диагностическая эффективность метода составила 76%. При этом из 50 исследованных соскобов в 38 были 305
Таблица — Эффективность различных лабораторных методов при диагностике саркоптоза свиней Количество соскобов В том числе в 50 соскобах обнаружены где % обнаружены выявлеия клещ Живые Мертвые Яйц п/п Методы лабораторных всего клещи, нимфы, исследований личинки, их Имаго Нимфы Личинки Имаго Нимфы Личинки (экз фрагменты и яйца 1 Метод компрессорного 50 38 76 25,3± 1,2 6,1±0,3 5±0,2 5±0,4 3±0,1 2±0,1 2±0, исследования (вариант 1) 2 Метод компрессорного 50 40 80 28,5±2,5 7,3±0,4 6,4±0,5 6,3±,0,8 4,5±0.6 3,2±0,1 3,3±0 исследования (вариант 2) 3 Метод компрессорного 50 43 86 33,4±1,9 7,5±0,3 8,3±0,6 7,3±0,2 5,2±0,3 4,3±0,5 3.6±0 исследования (вариант 3) 4 Метод компрессорного 50 44 88 35,5± 9,3±0,7 9,7±0,6 2,2±0,2 3,4±0,3 2,5±0,1 2,8±0 исследования (вариант 4) 5 Метод компрессорного 50 46 92 38,7± 12,4±1.2 10,7±1,3 8,3±0,7 6,3±0,9 4,5±0,3 4,3±0 исследования (вариант 5) 6 Метод Приселковой 50 44 88 38,5± 13,2±1.3 8,4±0,8 — — — — 7 Метод Шика 50 45 90 — — — 42,5±2,5 13,3±1.5 8.7±0,7 15,4± 8 Метод Добычина 50 47 94 — — — 57,8±3.5 21,4±2.4 12,3±2.1 22,3± 9 Модифицированный метод 50 48 96 — — — 72,7±4.6 25,4±2.7 16,3±1.8 31,5± 306
обнаружено клещи в разных стадиях развития и их яйца. С помощью данной методики всего было обнаружено живых 25 клещей имаго, 6 нимф, 5 личинок и 2 экземпляра их яиц, а также мертвых 5 клещей имаго, 3 нимфы, 2 личинки. При использовании второго варианта компрессионного исследования, в результате действия керосина, корочки и чешуйки соскоба размягчались и просветлялись. Диагностическая эффективность данного метода была несолько выше, она достигала 80%. При этом из исследованных 50 соскобов кожи было обнаружено живых 28 клещей имаго, 7 нимф, 6 личинок и 3 экземпляра их яиц, а также мертвых 6 клещей имаго, 4 нимфы, 3 личинки. Применение третьего варианта компрессионного метода, где для размягчения корок соскобов использовался глицерин, дало возможность в 43 из 50 исследованных соскобов кожи, обнаружить клещей в разных стадиях развития и их яйца. Диагностическая эффективность данного варианта была сравнительно выше, и она достигала до 86%. При этом всего было обнаружено живых 33 клеща имаго, 7 нимф, 8 личинок и 3 экземпляра их яиц, а также мертвых 7 клещей имаго, 5 нимф, 4 личинки. При проведении четвертого варианта компрессионного исследования в результате действия подсолнечной маслы корочки и чешуйки соскоба максимально размягчались и просветлялись. Поэтому диагностическая эффективность данного способа была выше предыдущих вариантов и достигала до 88%. При этом в исследованных 50 соскобах кожи были обнаружены 35 живых клещей имаго, 9 нимф, 9 личинок и 2 экзземпляра их яиц, а также мертвых 2 клеща имаго, 3 нимфы, 2 личинки. При помощи пятого варианта компрессионного исследования, где для размягчения корок соскобов использовался уксусная кислота, удалось выявить максимальное количество чесоточных клещей в разных стадиях развития и их яйца. Из исследованных 50 соскобов в 46 пробах были выявлены клещи Sarcoptes suis в разных стадиях развития и их яйца. С помощью данного способа было обнаружено 38 живых клещей имаго, 12 нимф, 10 личинок и 4 экземпляра их яиц, а также 6 мертвых клещей имаго, 4 нимфы, 4 личинки. При этом диагностическая эффективность данного варианта достигала до максимальных значений 92%. Таким образом, диагностическая эффективность различных вариантов компрессионных методов была довольно высокая и колебалась в пределах от 76 до 92%. Наиболее эффективным из них оказался вариант компрессионного метода, где для мацерации корок и чешуек и их просветления была использована молочная кислота. Данный способ отличается быстротой и надежностью диагностики саркоптоза свиней. Диагностическая эффективность метода Приселковой достигала до 88%, и при исследовании 50 соскобов кожи, она дала возможность в 44 из них обнаружить клещей в разных стадиях развития и их яиц. С помощью 307
данного метода всего было обнаружено 38 живых клещей имаго, 13 нимф, 8 личинок. Мертвых имаго, нимф, личинок и яйца живых клещей не были обнаружены. Метод Шика показывал 90% эффективности. При этом, из исследованных 50 соскобов кожи в 45 были обнаружены мертвые клещи в разных стадиях развития и их яйца. Живых клещей на разных стадиях развития не было выявлено. Всего было найдено 42 мертвых клеща имаго, 15 нимф и 13 личинок, а также 15 их яиц. Высокую диагностическую эффективность показывал метод Добычина, помощью которого из 50 соскобов кожи в 47 были обнаружены мертвые клещи в разных стадиях развития и их яйца. При этом диагностическая эффективность достигала 94%. Обнаружены 57 мертвых клещей имаго, 21 нимф и 12 личинок, а также 22 яйца. Живых клещей имаго, нимф и личинок не было обнаружено. Максимальной диагностической эффективностью обладал модифицированный нами флотационный метод с насыщенным раствором хлорида цинка. Диагностическая эффективность данной методики достигала 96%. При этом из 50 соскобов кожи в 48 удалось обнаружить мертвых клещей в разных стадиях развития и их яйца. Всего было обнаружено 57 мертвых клещей имаго, 21 нимф и 12 личинок, а также 22 экземпляра яиц. Живых клещей имаго, нимф и личинок также не удалось выявить. Заключение. При диагностике саркоптоза свиней наиболее эффективными являются флотационные методы, при помощи которых удается обнаружить чесоточных клещей даже при слабой интенсивности инвазии. Максимальной диагностической эффективностью обладает модифицированный нами флотационный метод с насыщенным раствором хлорида цинка. ЛИТЕРАТУРА: 1. Акбаев М.Ш. Паразитология и инвазионные болезни животных / М.Ш. Акбаев, А.А. Водянов, Н.Е. Косьминков и др. // — М.: «КолосС». 2020. 743 с.; 2. Шевцов А.А. Ветеринарная паразитология / А.А. Шевцов // М.: «Колос». 1965. 352 с. ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ САРКОПТОЗА СВИНЕЙ Фаррахов А.И., Латыпов Д.Г. Резюме При диагностике саркоптоза свиней максимальной диагностической эффективностью обладает флотационных метод с насыщенным раствором хлорида цинка. 308
01 Авг 2019 veterinar77 263УДК 619:616. 995.132:636.4 ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ САРКОПТОЗА СВИНЕЙ Фаррахов А.И. аспирант; Латыпов Д.Г. д.в.н., доцент Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана тел.: (843) 238-25-69 Ключевые слова: саркоптоз, диагностика, лабораторные методы. Key words: sarcoptosis, diagnostics, laboratory methods. В практических условиях диагноз на саркоптоз свиней ставят на основании эпизоотологических данных и клинических признаков. Окончательный диагноз на саркоптоз устанавливают на основании лабораторного исследования соскобов кожи. Для обнаружения в коже чесоточных клещей, их яйца, личинок и нимф предложен ряд методов лабораторных исследований (различные варианты компрессорного метода, методы Добычина, Приселковой, Шика и др.). Однако в доступной литературе мы не нашли, какой из этих методов является наиболее эффективным (1,2). Исходя из вышеизложенного, перед нами была поставлена задача изучить эффективность различных лабораторных методов для диагностики саркоптоза свиней. Материал и методы. Для проведения лабораторных исследований от 10 больных тотальной формой саркоптозом поросят 3-4 месяцев брали по 9 образцов соскобов (на каждый вариант исследования по одному соскобу) с различных участков кожи (ушная раковина, области шеи, спины, паха) по краям очага поражения. Для этого брюшистым скальпелем делали глубокие соскобы до появления следов крови (сукровицы). Места взятия соскобов обрабатывали молочной кислотой, т.к. она не обладает раздражающим действием, а бактерицидные ее свойства препятствуют развитию пиогенных осложнений. Для этого использовали следующие методы диагностики чесоточных клещей: 1. Метод компрессорного исследования (вариант 1). В этом варианте соскоб кожи помещали на предметное стекло, добавляли несколько капель 10%-ного раствора едкого калия и накрывали вторым предметным стеклом, слегка надавливали и через 10 минут рассматривали под малым увеличением микроскопа. 2. Метод компрессорного исследования (вариант 2). При проведении этого исследования соскоб кожи помещали на предметное стекло, добавляли несколько капель керосина и накрывали вторым предметным стеклом, слегка надавливали и спустя 10 минут 304
